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臥螺離心機在實(shí)驗室的應用測試實(shí)例介紹

文章出處:未知作者:admin人氣:發(fā)表時(shí)間:2018-06-11 18:23【

差速沉降離心法的舉例:
這是最普通的離心法。即采用逐漸增加臥螺離心機離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心,使沉降速度不同的顆粒,在不同的離心速度及不同離心時(shí)間下分批分離的方法。此法一般用于分離沉降系數相差較大的顆粒?!?br /> 差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時(shí)間。當以一定的離心力在一定的離心時(shí)間內進(jìn)行離心時(shí),在離心管底部就會(huì )得到最大和最重顆粒的沉淀,分出的上清液在加大轉速下再進(jìn)行離心,又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液,如此多次離心處理,即能把液體中的不同顆粒較好地分離開(kāi)。此法所得的沉淀是不均一的,仍雜有其它成分,需經(jīng)過(guò)2~3次的再懸浮和再離心,才能得到較純的顆粒。
此法主要由于組織勻漿液中分離細胞器和病毒,其優(yōu)點(diǎn)是:操作簡(jiǎn)易,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開(kāi),并可使用容量較大的角式轉子。缺點(diǎn)是:須多次離心,沉淀中有夾帶,分離效果差,不能一次得到純顆粒,沉淀于管底的顆粒受擠壓,容易變性失活。
密度梯度區帶離心法(簡(jiǎn)稱(chēng)區帶離心法):
區帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會(huì )擠壓變形,能保持顆?;钚?,并防止已形成的區帶由于對流而引起混合。
此法的缺點(diǎn)是:①離心時(shí)間較長(cháng);②需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液;③操作嚴格,不易掌握。
密度梯度區帶離心法又可分為兩種:
差速區帶離心法:當不同的顆粒間存在沉降速度差時(shí)(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數差)。臥螺式污泥脫水機組,在一定的離心力作用下,顆粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介質(zhì)的不同區域上形成區帶的方法稱(chēng)為差速區帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數差的顆粒 (20%的沉降系數差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質(zhì),與顆粒的密度無(wú)關(guān),大小相同,密度不同的顆粒(如線(xiàn)粒體,溶酶體等)不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液,樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上,離心時(shí),由于離心力的作用,顆粒離開(kāi)原樣品層,按不同沉降速度向管底沉降,離心一定時(shí)間后,沉降的顆粒逐漸分開(kāi),最后形成一系列界面清楚的不連續區帶,沉降系數越大,往下沉降越快,所呈現的區帶也越低,離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束,樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液,其最大密度和濃度可達1.28kg/cm3和60%。此離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉速和時(shí)間。
(2)等密度區帶離心法:離心管中預先放置好梯度介質(zhì),樣品加在梯度液面上,或樣品預先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管,污泥脫水機通過(guò)離心形成梯度,這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式。
離心時(shí),樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動(dòng)到與它們的密度相等的等密度點(diǎn)的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態(tài)后,再延長(cháng)離心時(shí)間和提高轉速已無(wú)意義,處于等密度點(diǎn)上的樣品顆粒的區帶形狀和位置均不再受離心時(shí)間所影響,提高轉速可以縮短達到平衡的時(shí)間,離心所需時(shí)間以最小顆粒到達等密度點(diǎn)(即平衡點(diǎn))的時(shí)間為基準,有時(shí)長(cháng)達數日。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒大小和形狀無(wú)關(guān),但大小和形狀決定著(zhù)達到平衡的速度、時(shí)間和區帶寬度。等密度區帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化絕CSCl,其密度可達 1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離復合蛋白質(zhì),但簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)不適用。
收集區帶的方法有許多種,例如:
(1)用注射器和滴管由離心管上部吸出。
(2)有針刺穿離心管底部滴出。
(3)用針刺穿離心管區帶部份的管壁,把樣品區帶抽出。
(4)用一根細管插入離心管底,泵入超過(guò)梯度介質(zhì)最大密度的取代液,將樣品和梯度介質(zhì)壓出,用自動(dòng)部分收集器收集。
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